如何正确放置试管于离心机[无卵子试管制作方法]
1. 琼脂糖选择:不同品牌、批次的琼脂糖杂质含量不一,这会影响到DNA的迁移速度和荧光背景的强度,因此需谨慎挑选。
2. 凝胶配置:配置凝胶时,所加缓冲液需与电泳槽内的缓冲液相匹配,溶解后的凝胶应迅速倒入板内,避免凝固或聚集。确保倒入平板的凝胶无气泡,以免影响电泳结果。
3. 电泳缓冲液更新:电泳缓冲液需定期更换,以保持电泳所需的离子强度和pH值稳定。
4. 样品添加量:通常,使用0.5厘米宽的梳子可添加0.5克DNA。样品量需根据样品孔的大小以及DNA片段的数量和大小来决定。若进样孔较大,需增加上样量,否则条带可能变浅或不清晰。若加样过多,可能损坏取样孔,导致拖尾现象,DNA片段越大,这种现象越明显。
5. DNA样品盐浓度:DNA迁移率受样品盐浓度影响,平行对照样品应使用相同缓冲条件以消除影响。DNA迁移率还取决于琼脂糖凝胶的浓度和迁移分子的形状及大小。不同浓度的凝胶适用于分离不同种类的DNA分子,通过制备琼脂糖凝胶,可根据DNA分子范围确定凝胶浓度。为提高分辨率,小片段DNA的电泳应使用聚丙烯酰胺凝胶电泳。
6. 离心机放置试管:离心机底部应放置棉花或试管垫。离心机通过离心力分离不同比重的固体或液体。目前试管离心机的转盘设计允许试管垂直或倾斜放置,但最佳离心效果是水平放置试管。这种设计使得离心机拆卸较为困难。
7. 离心机操作步骤:使用离心机时,需确保离心管与内容物平衡,重量差在说明书规定范围内。不同转子的公差差异需注意,转子不能安装奇数个管子。若转子仅部分安装,需对称放置管子以保证均匀负载。离心时,转子需预冷却至低于室温。操作过程中,需密切关注设备运转情况,异常声音出现时立即停止并检查。每个转子都有最高转速和使用限制,超速使用需参照用户手册,并记录累计使用时间。加载溶液时,需遵循离心机具体操作说明,根据液体特性和体积选择合适的离心管。使用后,需清洁并干燥转子,保护其不受损伤。
8. 离心机启动问题:若转子位置不正确或样品装载不平衡,可能导致离心机启动。现代离心机具有防不平衡功能,但若不平衡超过限度,会自动切断电源。轴断裂是可能发生的严重事故之一,需特别注意。
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